茶树花青素还原酶基因在大肠杆菌中的表达及优化

doi:10.13305/j.cnki.jts.2011.04.014

茶叶科学 ›› 2011, Vol. 31 ›› Issue (4): 326-332.doi: 10.13305/j.cnki.jts.2011.04.014

茶树花青素还原酶基因在大肠杆菌中的表达及优化

骆洋¹, 王弘雪², 王云生¹, 卢忠尉¹, 刘亚军², 单育², 陈啸天¹, 叶辉¹, 高丽萍^1*, 夏涛^2*

1. 安徽农业大学生命科学学院,安徽合肥 230036;
2. 安徽农业大学教育部茶叶生物化学与生物技术重点实验室,安徽合肥 230036

收稿日期:2011-01-07 修回日期:2011-03-08 出版日期:2011-08-15 发布日期:2019-09-09
作者简介:骆洋（1987— ）,男,硕士,安徽阜阳人,主要从事茶树次生代谢及分子生物学研究。
基金资助:
973计划前期项目（No.2007CB116211）、国家自然科学基金（No.30771755、No.30972401和No.31000314）、安徽省自然科学基金（No.09041-1006）、安徽省教育厅自然科学研究项目（No. KJ2010A117）

Expression and Optimization of Anthocyanin Reductase Gene of Tea Plant [Camellia sinensis (L.) O. Kuntze] in Escherichia coli

LUO Yang¹, WANG Hong-xue², WANG Yun-sheng¹, LU Zhong-wei¹, LIU Ya-jun², SHAN Yu², CHEN Xiao-tian¹, YE Hui¹, GAO Li-ping^1*, XIA Tao^2*

1. School of Biology Science, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China;
2. Key Lab of Tea Biochemistry and Biotechnology, Ministry of Education, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China

Received:2011-01-07 Revised:2011-03-08 Online:2011-08-15 Published:2019-09-09

摘要/Abstract

摘要： 茶树花青素还原酶是催化非酯型儿茶素EC和EGC合成的关键酶。采用RT-PCR技术,获得了茶树花青素还原酶基因的开放阅读框,它编码含337个氨基酸的蛋白质,推测分子量为37kD,等电点为6.54;成功地将该基因重组到表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌rosetta中进行原核表达;优化了原核表达中诱导时间、诱导温度、IPTG浓度、氨苄青霉素浓度,纯化出目的蛋白。HPLC检测表明,目的蛋白具有ANR酶活性。

关键词: 茶树, 花青素还原酶, 原核表达, 酶活性

Abstract: Anthocyanin reductase is a key enzyme in the biosynthesis of EC and EGC in tea plant. The open reading frame of anthocyanin reductase gene (ANR), which encoding a 337 amino acids protein, was cloned from tea plant 〔Camellia sinensis (L.) O. Kuntze 〕 by RT-PCR. The deduced protein molecular weight was 37kD and its theoretical isoelectric point was 6.54. The gene was cloned into the expression vector pET32a (+) for expression in prokaryotic cells. The SDS-PAGE results showed that the anthocyanin reductase peoteins was expressed in Escherichia coli rosetta. The optimal inducing conditions including time, temperature, IPTG concentration, ampicillin concentration were studied. The deduced protein was purified and its activity was detected by HPLC.

Key words: tea plant [Camellia sinensis (L.) O. Kuntze], anthocyanin reductase, prokaryotic expression, enzyme activity

中图分类号:

S571.1
Q554

骆洋, 王弘雪, 王云生, 卢忠尉, 刘亚军, 单育, 陈啸天, 叶辉, 高丽萍, 夏涛. 茶树花青素还原酶基因在大肠杆菌中的表达及优化[J]. 茶叶科学, 2011, 31(4): 326-332. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2011.04.014.

LUO Yang, WANG Hong-xue, WANG Yun-sheng, LU Zhong-wei, LIU Ya-jun, SHAN Yu, CHEN Xiao-tian, YE Hui, GAO Li-ping, XIA Tao. Expression and Optimization of Anthocyanin Reductase Gene of Tea Plant [Camellia sinensis (L.) O. Kuntze] in Escherichia coli[J]. Journal of Tea Science, 2011, 31(4): 326-332. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2011.04.014.

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