2012年, 第32卷, 第6期　
刊出日期：2012-12-15

  

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  Caco-2细胞模型在茶叶生物活性成分研究中的应用

  谢艳兰, 郭昊蔚, 郑羡慕, 须海荣, WilfriedAndlauer, AgnieszkaKosińska

  茶叶科学. 2012, 32(6): 471-479. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.003

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  Caco-2细胞单层的形态和功能特性都类似于人小肠上皮细胞,是研究营养素或药物吸收、转运和代谢的一个重要体外模型,近年来在茶叶生物活性成分的研究中也得到广泛应用。本文对Caco-2细胞中儿茶素、茶氨酸、没食子酸和咖啡碱的吸收和转运机制,儿茶素的代谢以及茶叶生物活性成分药效机理的研究进行了综述,并对采用Caco-2细胞模型快速评价茶叶生物活性成分的吸收特性以促进茶叶保健产品和制剂的开发进行了展望。
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  贵州绿茶中咖啡碱和儿茶素含量分析

  李俊, 郭晓关, 庞宏宇, 朱福建, 王震, 赖飞

  茶叶科学. 2012, 32(6): 480-484. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.010

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  对贵州省243份绿茶样品中咖啡碱和儿茶素类物质采用高效液相色谱方法进行检测。结果表明：贵州省绿茶中儿茶素含量范围为9.14%~27.28%,平均含量15.71%;咖啡碱含量为1.08%~3.33%,平均含量2.24%。各地区茶叶儿茶素品质指数多数为1000~2000,其中黔南地区的最高为1975.51;各地区的儿茶素苦涩味指数主要在8.00~17.04之间,黔西南地区的苦涩味指数最低为8.00。据此分析可得,贵州绿茶具有很高的利用价值,春茶适合开发高品质的名优茶,秋茶适合用于茶叶深加工或有效成分的提取。
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  羟磷灰石/SDBS丝网印刷碳电极快速测定茶叶痕量铅

  杨舫, 赵广英, 窦文超

  茶叶科学. 2012, 32(6): 485-493. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.002

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  为改善快速测定铅电化学传感器的稳定性、灵敏度和安全性,本研究利用SDBS（十二烷基苯磺酸钠）分散羟磷灰石替代惯用的有毒汞修饰丝网印刷碳电极,并滴加Nafion膜增加稳定性,构建了一种快速测定痕量铅的新型电化学传感器。采用方波溶出伏安法,支持电解质为0.1mol/L HAc-NaAc,在优化的羟磷灰石量、测试底液pH、富集时间等工作条件下,得到2~300μg/L线性范围内的铅标准曲线,检测限为0.46µg/L（S/N=3）;其重复性好,连续5次测定后的相对标准偏差为4.59%;本方法与ICP-MS法对茶叶样本的测定结果相近。研究出的快速检测铅的新型电化学传感器具有较好的稳定性、灵敏度和安全性,且测定结果准确,具有一定的应用潜力。
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  固相萃取结合高效液相制备茶树没食子酸衍生物

  卢忠尉, 蒋晓岚, 刘亚军, 刘莉, 高丽萍, 夏涛

  茶叶科学. 2012, 32(6): 494-499. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.001

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  没食子酸衍生物是茶树酚酸中的主要成分,是茶汤中重要的鲜味增强剂,具有抗过敏、抗抑郁和增强认知能力等作用。利用固相萃取（solid-phase extraction,SPE）结合制备高效液相色谱（preparative high performance liquid chromatography,PHPLC）,从茶树鲜叶中分离制备出高纯度的3-O-没食子酰奎尼酸和β-D-没食子酰葡萄糖,并利用LC/TOF-ESI-MS、¹H-NMR和¹³C-NMR对它们的结构进行了鉴定。该方法操作简单、纯化效果好。
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  茶树泛素活化酶基因全长cDNA克隆及序列分析

  邓婷婷, 吴扬, 李娟, 李银花, 黄建安, 刘仲华

  茶叶科学. 2012, 32(6): 500-508. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.011

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  应用cDNA-AFLP技术分离安吉白茶阶段性返白过程中的差异表达基因,获得一白期表达上调片断TDF（transcript derived fragment, TDF）。BLAST比对结果显示,该片段与其他物种的泛素活化酶基因有很高的相似性。通过SMART-RACE技术分别扩增出其3′和5′末端序列,成功获得该基因全长cDNA序列（GenBank登录号JN180299）。所得序列全长3764bp,其开放阅读框编码1094个氨基酸,蛋白分子量约为121kD。该基因的氨基酸序列与烟草、蓖麻、水稻、小麦、拟南芥中的UBA1基因编码的氨基酸序列分别有82%、81%、79%、79%、77%的同源性。qRT-PCR分析表明,安吉白茶UBA1基因在白化期的表达量是返绿期的2.49倍。泛素活化酶是泛素蛋白酶体介导的蛋白质降解系统中1个关键酶,茶树泛素活化酶基因的克隆为进一步研究安吉白茶阶段性白化的分子机理奠定了基础。
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  生长素相关基因在茶树腋芽冬季休眠不同生长阶段的表达分析

  王新超, 马春雷, 杨亚军, 曹红利, 郝心愿, 金基强

  茶叶科学. 2012, 32(6): 509-516. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.012

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  利用实时定量PCR技术研究了从本实验室构建的茶树休眠芽与萌动芽抑制消减杂交文库中分离出来的与生长素相关的基因片段在茶树腋芽冬季休眠不同阶段的表达模式。研究结果表明：（1）与生长素响应因子同源的6条EST片段中,有5条的表达量休眠期高于萌发期,另外1条则相反。（2）与生长素原初反应基因同源的3条EST片段的表达模式存在差异,其中与SAURs同源的EST在休眠阶段上调表达,休眠解除以后下调表达。而与GH3和Aux/IAAs同源的2条EST在萌发阶段有一个表达高峰,而在休眠期和萌发以后,表达量都下降。（3）与生长素结合类蛋白同源的茶树CsGLP1表达量在萌发期高于休眠期。（4）与生长素内向运输载体基因同源的EST片段在深休眠期的表达量最高。（5）2条受生长素调控的EST表现出不同的表达模式,生长素诱导表达的EST在休眠期的表达量高于萌发期及随后阶段,而另外1条受生长素抑制的EST片段在萌发期的表达远远高于休眠期。这些结果初步说明生长素促进茶树腋芽的冬季休眠。
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  基于茶树SNP的dCAPS标记体系研究

  张成才, 王丽鸳, 韦康, 成浩, 包云秀, 刘本英, 汪云刚

  茶叶科学. 2012, 32(6): 517-522. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.013

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  从茶树EST序列中搜寻出候选SNPs位点,在候选SNPs两侧设计测序引物进行PCR扩增,并对扩增产物双向测序验证;然后从每个扩增子中选择一个确证的SNPs,设计dCAPS引物,并进行扩增和酶切验证,将SNPs转化为dCAPS标记;最后,在长叶白毫×福鼎大白的F1群体中检测了标记的分离情况。结果发现,20对测序引物中有11对扩增成功,共确证了17个SNPs,占检测总数的54.8%;在设计的11对dCAPS引物中,有8对在长叶白毫、福鼎大白和龙井43等8个品种中表现出多态性,成功转化为dCAPS标记,转化成功率72.7%;8个dCAPS标记中的DCC229和DCC371在长叶白毫和福鼎大白之间表现有多态性,经检测,它们在这2个品种的F1群体中均符合孟德尔1︰1分离。
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  茶树叶片GDH、GS、GOGAT基因的克隆及荧光定量PCR分析

  林郑和, 钟秋生, 陈常颂

  茶叶科学. 2012, 32(6): 523-529. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.014

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  以4个茶树种质为试验材料,克隆得到茶叶中氨基酸合成转化关键酶基因：谷氨酸脱氢酶（GDH）、谷氨酰胺合成酶（GS）、谷氨酰胺α-酮戊二酸氨基转移酶（GOGAT）的保守区。在GenBank登录号分别为：JN602371、JN602372、JN602373。通过SYBR Green I实时荧光定量PCR检测,发现GDH酶基因在茶树种质0314C（相对高氨基酸种质）中的表达显著增强,而在0212-15种质（相对低氨基酸种质）中却显著下降。GS、GOGAT酶基因在种质0314C中表达显著下降,而在0212-15、0318D种质中显著增强。通过回归分析,GS基因表达与茶氨酸、赖氨酸、丙氨酸呈负相关,而GDH与茶氨酸呈正相关。
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  茶氨酸复合制剂缓解体力疲劳功能评价

  谭俊峰, 林智, 彭群华, 郭丽, 吕海鹏

  茶叶科学. 2012, 32(6): 530-534. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.006

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  依据保健食品检验与评价技术规范对茶氨酸复合制剂的缓解体力疲劳功能进行评价。人体体质量以60kg计,样品人体推荐剂量为每日1.4g,采用昆明种小鼠设定低、中、高3个剂量组分别为0.12、0.23、0.70g/kg,分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍灌胃,对照组以等量蒸馏水灌胃,连续30d。结果显示,高剂量组能明显延长小鼠负重游泳时间,降低血清尿素含量,增加肝糖原含量,并对小鼠运动前后血乳酸含量无影响,表明茶氨酸复合制剂具有缓解体力疲劳的功能。
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  一种茶叶复合物缓解醉酒症状研究

  尹爱武, 田润, 李探芳

  茶叶科学. 2012, 32(6): 535-538. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.007

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  研究了一种茶叶复合物的解酒作用。通过观察小鼠灌胃白酒后翻正反射消失与恢复时间,急性乙醇中毒的死亡率,自发活动的变化以及小鼠血液中乙醇浓度,以评价茶叶复合物缓解醉酒症状的作用。结果显示：低、中、高剂量茶叶复合物均能延长翻正反射消失时间,缩短小鼠翻正反射恢复时间（P<0.01）;降低急性乙醇中毒小鼠的死亡率;抑制乙醇致中枢兴奋引起的小鼠自主活动次数增多（P<0.01）;高剂量茶叶复合物能显著降低灌胃乙醇后30、60、90、120、150min小鼠血液中的乙醇浓度（P<0.05或P<0.01）,各时间点小鼠血浆乙醇质量浓度分别为（523±129）、（671±175）、（954±203）、（1012±326）、（634±139）mg/L。本研究为茶叶解酒产品的开发提供了一定的理论基础。
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  茯砖茶对H₂O₂诱发LLC-PK1细胞损伤的保护作用

  宋家乐

  茶叶科学. 2012, 32(6): 539-542. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.004

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  探讨茯砖茶乙醇提取物（FTE）对H₂O₂诱发猪肾近曲小管LLC-PK1上皮细胞氧化损伤的保护作用。以不同质量浓度（10~200μg/mL）的FTE预培养LLC-PK1细胞24h后,换用含500μmol/L H₂O₂的DMEM细胞培养液继续培养4h建立细胞氧化损伤模型。MTT法检测细胞生存率,硫代巴比妥酸比色法测定细胞内丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量,比色法测定细胞内过氧化氢酶（catalase, CAT）,超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-px）含量。经不同浓度FTE预处理24h后,受损细胞的生存率上升,细胞内MDA生成量减少。同时,细胞内主要抗氧化酶（CAT、SOD和GSH-px）含量也较对照组增加,并呈剂量效应关系。结果提示,预先经FTE的保护可有效地对抗H₂O₂诱发的LLC-PK1细胞氧化损伤。
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  普洱茶不同溶剂提取组分降脂减肥作用的比较研究

  熊昌云, 彭远菊, 王兴华, 崔文锐, 李凤娟, 何普明

  茶叶科学. 2012, 32(6): 543-551. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.008

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  采用丙酮、水、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇连续萃取普洱茶,旋转蒸发后冷冻干燥得到氯仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层以及剩余水层4个主要分离组分,利用不同的组分灌胃经过肥胖造模处理的ICR小鼠,与普洱茶总水提取物和减肥药左旋肉碱进行比较,研究普洱茶不同组分对ICR肥胖小鼠的降脂减肥作用。实验结果表明,普洱茶总水提取物、乙酸乙酯萃取组分、剩余水层组分均对肥胖ICR小鼠具有很好的降脂减肥作用。其中乙酸乙酯层和剩余水层抑制脂肪累积（抑制率分别是24.7%和22.5%）的效果略差于减肥药物左旋肉碱（抑制率38.8%）,但在改善血清指标尤其是提高HDL-C水平方面（提高率为61.7%和73.4%）显著优于左旋肉碱（9.4%）,肝脏指标检测也得到了类似的结论,揭示普洱茶降脂减肥作用的主要成分可能存在于乙酸乙酯层和（或）剩余水层中。
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  茶园遥控式静电喷药施肥试验机

  李明, 刘仲华

  茶叶科学. 2012, 32(6): 552-558. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.009

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  为有效减少农村劳动力不足对茶产业发展造成的较大影响,提高农药、化肥的利用率来减少环境污染,设计了一种茶园遥控式静电喷药施肥机。主要由机架、动力、喷药系统、施肥系统、控制系统等组成,可手动式和无线遥控行走。48V直流无刷电机实施行走和施肥及12V直流叶片泵实施喷药;采用容量式调节施肥量,并完成浅施肥和覆土;采用茶树冠仿形喷杆和高压静电实施喷雾。试验结果得出该机能较好地完成施肥施药,明显提高农药叶面雾滴沉积量,是一种有发展前景的机型。
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  灵隐寺与少林寺禅茶文化的比较研究

  马晓俐

  茶叶科学. 2012, 32(6): 559-564. https://doi.org/10.13305/j.cnki.jts.2012.06.005

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  目前文化界、茶学界等多个学科和领域都对“禅”、“禅茶”以及“禅茶文化”产生了浓厚的兴趣。根据笔者对河南和浙江茶文化与经济等多方面的了解,加之近年来对佛学的学习,就灵隐寺和少林寺在茶事活动、禅茶文化传播、信众信仰、知识产权保护等方面做了调研,据此分析两寺在禅茶文化方面所作贡献的相同与差异,并作简要归纳与总结。