茶毛虫核型多角体病毒ph基因抗体的制备与利用

doi:10.13305/j.cnki.jts.2008.04.005

茶叶科学 ›› 2008, Vol. 28 ›› Issue (4): 260-266.doi: 10.13305/j.cnki.jts.2008.04.005

茶毛虫核型多角体病毒ph基因抗体的制备与利用

王礼中^1,2, 肖强^1,*, 张传溪²

1. 中国农业科学院茶叶研究所,浙江杭州310008;
2. 浙江大学应用昆虫研究所,浙江杭州 310029

收稿日期:2008-04-01 出版日期:2008-08-15 发布日期:2019-09-12
通讯作者: *,xqtea@vip.163.com
作者简介:王礼中(1983— ),男,江苏南京人,硕士,主要从事茶树害虫的生物防治的研究。
基金资助:
国家科技支撑计划（2006BAD06B01）和浙江省科技计划（2003C2003）

Preparation of the Antibody Against EupsNPV Polyhedrin and Its Utilization in Detection of the Viral Pesticide

WANG Li-zhong^1,2, XIAO Qiang^1,*, ZHANG Chuan-xi²

1. Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310008, China;
2. Institute of Applied Entomology, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China

Received:2008-04-01 Online:2008-08-15 Published:2019-09-12

摘要/Abstract

摘要： 以茶毛虫核型多角体病毒（EupsNPV）的基因组DNA为模板,PCR扩增出全长为741 bp的ph基因编码区片段。将Ep-ph编码区插入pET-28-a,构建了原核表达载体pET-28-a-Ep-ph,转化大肠杆菌BL21（DE3）,在IPTG诱导下进行了高效的表达。以经表达纯化的目的融合蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔,制备了EupsNPV的ph抗体,测得的抗体效价为6.4×10⁴。Western blotting检测表明制得的抗体对核型多角体病毒有良好的特异性。利用制备的抗体用间接ELISA方法对茶毛虫病毒样品进行了定量分析,得到线性回归方程为y=0.4152x-0.8299,相关系数r=0.9897（P<0.01）。间接ELISA方法表明该抗体可以用于核型多角体病毒生物农药的定量检测,从而为核型多角体病毒的检测农药制剂提供了一种准确有效的方法。

关键词: 茶毛虫核型多角体病毒, 多角体蛋白基因, 多克隆抗体, 间接ELISA, 检测

Abstract: The 741 bp coding region of polyhedrin gene (ph) was amplified from Euproctis pseudoconspersa nucleopolyhedrovirus（EupsNPV）genome and its prokaryotic expression vector pET-28-a-Ep-ph was constructed. Then the prokaryotic expression plasmid was transformed into Escherichia.coli. BL21（DE3）for expression. The expressed fusion protein was separated by SDS-PAGE and retrieved from the gel. New Zealand white rabbit was immunized with the purified fusion protein and the antiserum against ph with a titre of 6.4×10⁴ was prepared. Western blotting indicated that the prepared polyclonal antibody was specific for polyhedrin. The EupsNPV was detected by indirect ELISA and its regression equation was obtained: y=0.4152x-0.8299 with correlation coeffient r=0.9897(P<0.01). Indirect ELISA detection showed that the antibody could be used for quantitative detection of the NPV in a commercial bio-pesticide and provided an accurate and effective method for detection.

Key words: Euproctis pseudoconspersa nucleopolyhedrovirus（EupsNPV）, polyhedrin gene, polyclonal antibody, indirect ELISA, detection

中图分类号:

S435.711

王礼中, 肖强, 张传溪. 茶毛虫核型多角体病毒ph基因抗体的制备与利用[J]. 茶叶科学, 2008, 28(4): 260-266. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2008.04.005.

WANG Li-zhong, XIAO Qiang, ZHANG Chuan-xi. Preparation of the Antibody Against EupsNPV Polyhedrin and Its Utilization in Detection of the Viral Pesticide[J]. Journal of Tea Science, 2008, 28(4): 260-266. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2008.04.005.

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茶毛虫核型多角体病毒ph基因抗体的制备与利用

Preparation of the Antibody Against EupsNPV Polyhedrin and Its Utilization in Detection of the Viral Pesticide

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