茶氨酸生物合成工程菌构建

doi:10.13305/j.cnki.jts.2007.01.009

茶叶科学 ›› 2007, Vol. 27 ›› Issue (1): 61-66.doi: 10.13305/j.cnki.jts.2007.01.009

茶氨酸生物合成工程菌构建

王贤波, 王丽鸳, 成浩^*, 周健, 林智

农业部茶叶化学工程重点实验室,中国农业科学院茶叶研究所,浙江杭州 310008

收稿日期:2006-07-11 修回日期:2006-11-21 出版日期:2007-03-25 发布日期:2019-09-11
通讯作者: * 成浩, chenghao@mail.tricaas.com
作者简介:王贤波（1979— ）,男,硕士研究生,主要从事茶叶生物技术研究。

The Construction of the Engineered Escherichia coli Strain for the Biosynthesis of Theanine

WANG Xian-bo, WANG Li-yuan, CHENG Hao^*, ZHOU Jian, LIN Zhi

Key Lab of Tea Chemical Engineering, Ministry of Agriculture; Tea Research Institute, Chinese Acade my of Agricultural Sciences, Hangzhou 310008, China

Received:2006-07-11 Revised:2006-11-21 Online:2007-03-25 Published:2019-09-11

摘要/Abstract

摘要： 通过PCR扩增E.coli DH5α的γ-ggt基因,产物经纯化后用Kpn I和Xho I双酶切,回收γ-谷氨酰转肽酶基因目的片断,并与经相同双酶切的表达载体pET-32a连接,得到重组质粒pET-GGT。将重组质粒转化到E.coli BL21中,获得工程菌。工程菌株经0.05βmol/L IPTG,32℃诱导表达,湿菌体的酶活达到2.0βU/g,大约是出发菌株E.coli DH5α的15倍。工程菌催化L-谷氨酰胺和盐酸乙胺反应生成茶氨酸的产量达到29.40βg/L,L-Gln的转化率为48.22%,其催化L-谷氨酰胺和盐酸乙胺反应生成茶氨酸的能力比出发菌株E.coli DH5α提高了100多倍。

关键词: γ-谷氨酰转肽酶;, 茶氨酸, 工程菌, 构建

Abstract: γ-ggt was cloned by PCR from E.coli DH5α. Then, the PCR product of γ-ggt digested with two restriction enzymes, Kpn I and Xho I, was purified and ligated with the pET-32a vector digested with the same enzymes by T4 DNA ligase. Then the ligation product was transformed to E.coli BL21 and the engineered Escherichia coli strain was constructed successfully. The γ-Glutamyltranspeptidase was expressed with induction of 0.05βmmol/L IPTG in 32℃ incubation. The activity of 1βg fresh cells of engineered strain was 2.0βU/g,it is about 15 times higher than that of E.coli DH5α．Under the catalysis of cells of the engineered strain induced with IPTG, the yield of theanine from L-Gln and ethylamine was 29.40βg/L and the conversion rate of L-Gln as to theanine being 48.22%; it is about 100 times higher than that of E.coli DH5α．

Key words: γ-Glutamyltranspeptidase;, theanine, engineered strain, construction

中图分类号:

S571.1
Q523

王贤波, 王丽鸳, 成浩, 周健, 林智. 茶氨酸生物合成工程菌构建[J]. 茶叶科学, 2007, 27(1): 61-66. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2007.01.009.

WANG Xian-bo, WANG Li-yuan, CHENG Hao, ZHOU Jian, LIN Zhi. The Construction of the Engineered Escherichia coli Strain for the Biosynthesis of Theanine[J]. Journal of Tea Science, 2007, 27(1): 61-66. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2007.01.009.

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