茶树新梢cDNA文库的构建和ESTs测序成功率初步分析

doi:10.13305/j.cnki.jts.2004.01.003

茶叶科学 ›› 2004, Vol. 24 ›› Issue (1): 18-22.doi: 10.13305/j.cnki.jts.2004.01.003

茶树新梢cDNA文库的构建和ESTs测序成功率初步分析

陈亮¹,赵丽萍^1,2,高其康³

1 中国农业科学院茶叶研究所,农业部茶叶化学工程重点实验室,浙江杭州 310008;
2 中国农业科学院研究生院,北京100081;
3 浙江大学分析测试中心生物大分子研究室,浙江杭州 310029

收稿日期:2003-07-25 修回日期:2003-12-16 出版日期:2004-03-25 发布日期:2019-09-11
作者简介:陈亮（1967— ）,男,浙江缙云人,副研,博士,主要从事茶树种质资源和分子生物学研究。E-mail: tbtri@mail.hz.zj.cn
基金资助:
国家自然科学基金（30070486）、浙江省分析测试基金（02032）和浙江省留学人员择优资助项目

Construction of Tender Shoots cDNA Library and Preliminary Analysis of Expressed Sequence Tags Sequencing of Tea Plant

CHEN Liang¹, ZHAO Li-ping^{1, 2}, GAO Qi-kang³

1 Key Laboratory of Tea Chemical Engineering, Ministry of Agriculture; Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310008, China;
2 Graduate School of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China;
3 Biological Macromolecular Research Laboratory of Analyzing and Measurement Center, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China

Received:2003-07-25 Revised:2003-12-16 Online:2004-03-25 Published:2019-09-11

摘要/Abstract

摘要： 报道了国内第一个茶树cDNA文库的构建及其EST测序成功率分析。以Trizol一步法从龙井43春茶新梢中提取总RNA,分离纯化富含Poly (A)的mRNA,LD-PCR反转录合成双链cDNA,以λTripEX2为载体,构建了龙井43新梢cDNA文库。以XL1-Blue为受体菌测定原始文库的滴度为6.8×10⁵ pfu/ml,总克隆数为3.5×10⁵个,重组率为98.05%,扩增后文库总滴度为7.2×10⁹pfu/ml。对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定,表明插入片段大多分布在0.5-2.0 kb之间,绝大部分在1.0-1.5 kb左右。文库质量鉴定结果表明,构建的茶树新梢cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。对4320个克隆的序列测定表明,获得有用序列2963个,测序成功率为68.5%,剔除短序列后,首批共获得1687个茶树ESTs。

关键词: 茶学, 茶树[Camellia sinensis (L.) O. Kuntze], 新梢, mRNA, cDNA文库, EST, 测序

Abstract: The construction of the first cDNA library of tea plant [Camellia sinensis cv. Longjing 43] in China and the analysis of expressed sequence tags sequencing successful ratio were reported. Total RNA was isolated from tender tea shoots using TRIZOL single-step method, mRNA separated and then the double-strand cDNA amplified by LD-PCR. After size fractionation, the ds-cDNA was ligated to λTripEX2 and recombinant bacteriophages were packaged. The cDNA library was tittered and amplified using XL1-Blue as receptor bacterium. The titer of the original library was 6.8×10⁵pfu/ml with a recombinant rate of 98.05% and 3.5×10⁵ clones in total, the amplified titer was 7.2×10⁹pfu/ml. PCR amplification suggested the inserted cDNA fragments ranged from 0.5 kb to 2 kb, mostly from 1.0 kb to 1.5 kb. The data indicate that the tea cDNA library has high titer, high recombinant percentage and large inserted fragments. Totally, 4320 clones were sequenced, 2963 useful sequences were obtained, corresponding to 68.5%. The first batch of 1687 valid tea plant ESTs were generated.

Key words: Tea science, Tea plant (Camellia sinensis), Tender shoots, mRNA, cDNA library, ESTs, Sequencing

中图分类号:

S571.1
Q523

陈亮, 赵丽萍, 高其康. 茶树新梢cDNA文库的构建和ESTs测序成功率初步分析[J]. 茶叶科学, 2004, 24(1): 18-22. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2004.01.003.

CHEN Liang, ZHAO Li-ping, GAO Qi-kang. Construction of Tender Shoots cDNA Library and Preliminary Analysis of Expressed Sequence Tags Sequencing of Tea Plant[J]. Journal of Tea Science, 2004, 24(1): 18-22. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2004.01.003.

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