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茶叶科学 ›› 2000, Vol. 20 ›› Issue (02): 141-147.doi: 10.13305/j.cnki.jts.2000.01.014

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Bt基因表达载体的构建及对茶树遗传转化的研究

骆颖颖,梁月荣   

  1. 浙江大学茶学系!浙江杭州310029,浙江大学茶学系!浙江杭州310029
  • 出版日期:2000-12-25 发布日期:2000-02-20
  • 基金资助:
    国家自然科学基金资助项目! (39770 45 7); 浙江省科委资助项目! (96 1 1 2 1 1 0 )内容之一

  • Online:2000-12-25 Published:2000-02-20

摘要: 用限制性内切酶HindⅢ和BglⅡ从pGA4 71质粒中切取Bt基因并转入载体pCAMBIA2 30 1中 ,构建后的质粒含Bt基因、intron -GUS基因和NPTⅡ基因。将构建后的质粒转化大肠杆菌 ,通过三亲交配法分别导入农杆菌菌株LBA4 4 0 4、EHA10 5、pRi15834中。以茶树叶片、愈伤组织为转化的受体材料 ,用农杆菌介导法将其转入茶树中 ,获得了GUS瞬间表达。以潮霉素作为愈伤组织筛选的选择性试剂 ,效果明显优于卡那霉素 ,适宜浓度为 2 0 μ/ml;以卡那霉素作为茶树叶片材料的筛选试剂 ,50 μ/ml为宜。

关键词: 茶树, 遗传转化, 质粒构建, Bt抗虫基因, 农杆菌介导法