茶树α-tubulin基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

doi:10.13305/j.cnki.jts.2009.5.002

茶叶科学 ›› 2009, Vol. 29 ›› Issue (5): 336-340.doi: 10.13305/j.cnki.jts.2009.5.002

茶树α-tubulin基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

谭振, 童鑫, 房超, 江昌俊^*, 陈聪

安徽农业大学茶叶生物化学与生物技术教育部重点实验室,安徽合肥 230036

收稿日期:2009-02-07 修回日期:2009-04-21 出版日期:2009-10-15 发布日期:2019-09-09
通讯作者: * E-mail：jiangcj@ahau.edu.cn。
作者简介:谭振（1984— ）,男,安徽合肥人,硕士,研究方向为分子遗传学。
基金资助:
国家自然科学基金项目（30871568）和国家科技支撑计划子课题（2008BADC0B03）

Prokaryotic Expression of α-tubulin Gene of Camellia sinensis and Preparation of α-tubulin Polyclonal Antibody

TAN Zhen, TONG Xin, FANG Chao, JIANG Chang-jun^*, CHEN Cong

Key Laboratory of Tea Biochemistry and Biotechnology, Ministry of Education, Anhui Agricultural University, Hefei 230036,China

Received:2009-02-07 Revised:2009-04-21 Online:2009-10-15 Published:2019-09-09

摘要/Abstract

摘要： 根据茶树α-微管蛋白（α-tubulin）的mRNA全长序列（GenBank登录号DQ340766）设计引物,以RT-PCR方法扩增茶树α-tubulin基因,将扩增产物克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,并转化至大肠杆菌BL21trxB (DE3)中,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后以包涵体形式表达。以纯化后的α-tubulin融合蛋白制备兔多克隆抗体,用Western blot方法检测抗体特异性。结果显示α-tubulin蛋白以包涵体形式大量表达,以融合蛋白制备的抗体对茶树体内的α-tubulin具有良好的特异性。

关键词: 茶树, α-微管蛋白（α-tubulin）, 原核表达, 多克隆抗体

Abstract: According to the relevant complete mRNA sequence of α-tubulin gene of Camellia sinensis (accession NO. DQ340766), the coding region of α-tubulin gene was amplified using RT-PCR method, and its products were expressed in Escherichia coli using the pET-32a(+) vector. The fusion protein was expressed in the form of inclusion body when induced with isopropyl-D-thiogalatopyranoside (IPTG), then was purified to immunize the rabbit to produce the polyclonal antibody against α-tubulin. The specificity of the antibody was confirmed by Western blot analysis. The results of Western blot revealed well specificity of the antibody against α-tubulin in Camellia sinensis plant.

Key words: tea plant(Camellia sinensis), α-tubulin, prokaryotic expression, polyclonal antibody

中图分类号:

S571
Q785

谭振, 童鑫, 房超, 江昌俊, 陈聪. 茶树α-tubulin基因的原核表达及其多克隆抗体的制备[J]. 茶叶科学, 2009, 29(5): 336-340. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2009.5.002.

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