茶树鲜叶中维生素B6代谢酶PLK的活性分析

doi:10.13305/j.cnki.jts.2010.04.006

茶叶科学 ›› 2010, Vol. 30 ›› Issue (4): 269-272.doi: 10.13305/j.cnki.jts.2010.04.006

茶树鲜叶中维生素B₆代谢酶PLK的活性分析

钮甜甜¹, 张剑韵², 黄龙全^1,*

1. 安徽农业大学茶与食品科技学院,安徽合肥 230036;
2. 安徽农业大学生命科学学院,安徽合肥 230036

收稿日期:2009-12-28 修回日期:2010-03-22 发布日期:2019-09-11
通讯作者: lqhuang218@yahoo.com.cn,Tel：0551-5157862
作者简介:钮甜甜（1984— ）,女,安徽滁州人,硕士研究生。
基金资助:
安徽省教育厅自然科学重点科研项目（KJ2010A116）

Analysis on the Activity of Tea Pyridoxal Kinase

NIU Tian-tian¹, ZHANG Jian-yun², HUANG Long-quan^1,*

1. College of Tea & Food Science, Anhui Agricultural University, Heifei 230036, China;;
2. College of Life Science, Anhui Agricultural Universities, Hefei 230036, China

Received:2009-12-28 Revised:2010-03-22 Published:2019-09-11

摘要/Abstract

摘要： 吡哆醛激酶（Pyridoxal Kinase, PLK）是维生素B₆（VB₆）代谢关键酶。从茶鲜叶中直接提取含PLK的粗酶液,经过硫酸铵沉淀、透析处理后,采用苯肼衍生化方法检测定PLK活性,并对其基本酶学性质进行分析。结果表明,提取时加入100%茶鲜重的PVPP,效果最佳。纯化后的茶鲜叶PLK比活力为0.737 nmol/(min·mg),纯化倍数为4.0;当有二价金属离子存在时,PLK才具有催化活性,其中Zn²⁺对其催化作用最强。该酶的最适反应温度为60℃;在pH6.0左右酶活力最高。在最适反应条件下,测得反应底物ATP和PL的Km值分别为19.3 μmol/L和53 μmol/L。

关键词: 茶叶, 维生素B₆, 吡哆醛激酶, 活性分析

Abstract: Pyridoxal Kinase (PLK) is the key enzyme in VB₆ metabolism. The crude solution of PLK enzyme was directly extracted from tea plant, after depositing and dialysing with ammonia sulfate by using the phenylhydrazine derivative method to assay the activity of the PLK and its properties. Results showed that the addition of 100%(m/m) PVPP of the fresh tea leaves extraction the PLK could get the best results. The purified tea PLK was enriched by 4.0 fold and its specific activity was 0.737 nmol/(min·mg protein). The requirement of divalent ion for catalysis was mandatory, Zn²⁺was the most efficient ion for catalysis; the optimum temperature and pH of the enzyme were 60℃ and 6.0, respectively. Under optimal conditions, the Km values for pyridoxal and its reactive substrate ATP were 19.3 μmol/L and 53 μmol/L.

Key words: tea, vitamin B₆, pyridoxal kinase, analysis of activity

中图分类号:

钮甜甜, 张剑韵, 黄龙全. 茶树鲜叶中维生素B₆代谢酶PLK的活性分析[J]. 茶叶科学, 2010, 30(4): 269-272. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2010.04.006.

NIU Tian-tian, ZHANG Jian-yun, HUANG Long-quan. Analysis on the Activity of Tea Pyridoxal Kinase[J]. Journal of Tea Science, 2010, 30(4): 269-272. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2010.04.006.

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Analysis on the Activity of Tea Pyridoxal Kinase

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